بررسي تجربي فرآيند پگيليشن اينترفرون بتا 1آ

كارشناسي ارشد

داروهاي بيولوژيك ويا زيست‌داروها داروهايي هستند كه از منابع زيستي گرفته شده باشند. واكسن، خون و فراورده‌هاي آن، ياخته‌هاي سوماتيك، آلرژن‌ها، بافت‌هاي زيستي و پروتئين‌هاي نوتركيب‌كننده شناخته‌شده‌ترين انواع زيست‌داروها به شمار مي‌روند. تا به امروز، بيوتكنولوژي بيش از 400 نوع دارو و واكسن جديد توليد نموده است كه حدود 200 نوع بيماري از جمله انواع مختلف سرطان¬ها و بيماري هاي آلزايمر، بيماري¬هاي قلبي، ديابت، بيماري MS، ايدز و آرتريت را مورد هدف قرار مي‌دهند. اينترفرون¬هاي انساني، گليكوپروتئين (پروتئينهايي متصل به مولكولهاي قند) هستند و امروزه اعتقاد بر اين است كه در كنترل انواع عفونت¬هاي ويروسي، از جمله سرماخوردگي نقش دارند. اين اينترفرون¬ها، پتانسيل¬ كنترل سرطان را نيز دارند، اما توليد بسيار اندك اين تركيبات همواره مانعي در برابر شناخت وسعت كارايي آنها بوده است. پگيليشن معمولاً يك مرحله اضافي در انتهاي فرآيند توليد يك پروتئين مي باشد. هدف پگيليشن افزايش اندازه پروتئين و جلوگيري از خروج آن از بدن از طريق كليه مي باشد كه مجدداً پروتئين به جريان خون بيمار بازگشته و طي زمان بيشتر پروتئين طي فرآيند هيدروليز از PEG جدا شده و جذب بدن گردد. اين فرآيند باعث كاهش تعداد دوزهاي تزريق بيمار و نهايتاً رضايت بيمار مي گردد. در اين پايان نامه فعالسازي PEG جهت پگيليشن داروي اينترفرون بتا 1 آ و همچنين جداسازي داروي اينترفرون بتا 1 آ از آلبومين و درنهايت اتصال PEG فعال به اينترفرون بتا 1 آ بصورت تجربي در آزمايشگاه شركت بيوسان فارمد بررسي گرديده است. در طي اين آزمايش ابتدا اينترفرون بتا 1 آ فرموله شده از آلبومين جدا سازي شده و طي سه مرحله m-PEG به پگ آلدهيد تبديل گشته است. پس از آن دو ماده با حرارت دهي ملايم طي 20 ساعت واكنش داده و پيوند كووالانسي بين پگ آلدهيد و اينترفرون بتا 1 آ تشكيل گرديده است. پس از آن طي اولترافيلتراسيون پگ و اينترفرون هاي واكنش نداده جداسازي گرديده و پگ اينترفرون بتا 1 آ نيز جمع آوري گرديد. تست NMR جهت بررسي تشكيل پگ آلدهيد، تست SDS-PAGE جهت بررسي كيفيت پروتئين و بررسي جرم مولي پروتئين قبل و بعد از پگيليشن، تست مالدي تاف جهت بررسي وزن مولكولي پروتئين قبل و بعد از پگيليشن، تست با دستگاه CD و فلورسنت جهت بررسي تغييرات ساختار پروتئين و مقايسه قبل و بعد از پگيليشن و بررسي با كيت سنجش بردفورد جهت غلظت پروتئين واكنش نداده كه براساس آن راندمان كار 74 درصد تعيين گرديد.

193768

دانشگاه علم و صنعت ايران

دكتر د اريوش عابدي

طراحي فرآيند

دكتر اميد وحيدي