عنوان
رديابي دو ايزوفرم سوپراكسيد ديسموتاز(AmSOD1 و AmSOD2) در برگ گياه حرا در پاسخ به تنش نمك و سرب با استفاده از توليد آنتي‌بادي پلي‌كلونال عليه اين دو ايزوفرم
نويسنده اصلي
مهدويان روشن، مهشاد
محل تحصيل
اصفهان : دانشگاه صنعتي اصفهان
رشته تحصيلي
بيوتكنولوژي
مقطع تحصيلي
كارشناسي ارشد
چكيده
گياه حرا با نام علمي Avicennia marina (Forsk.) Vierh ، گونه‌اي از گياهان مانگرو واقعي است كه در مناطق جنوبي ايران يافت مي‌شود. واكنش‌هاي تطبيقي گسترده‌اي در گياه تكامل يافته‌است كه حرا را براي رشد در محيط‌هاي تنش‌زا سازگار مي‌كند. گونه‌هاي فعال اكسيژن(ROS) در بخش‌هاي مختلف سلول‌هاي هوازي در شرايط طبيعي و پاتوژنيك توليد مي‌شود. بروز تنش در گياهان و جانوران ظرفيت آنتي‌اكسيداني ارگانيسم را از طريق تجمع بيش از حد اين گونه‌هاي فعال تحت تأثير قرار مي‌دهد و موجب آسيب‌هاي بسياري در سلول مي‌شود. سوپر اكسيد ديسموتاز يكي از آنزيم‌هاي آنتي‌اكسيداني ضروري در سيستم‌هاي دفاعي، با تجزيه راديكال سوپراكسيد از سلول در برابر آسيب‌هاي گونه‌هاي فعال اكسيژن و نيتروژن حفاظت مي‌كند. در اين پژوهش در ابتدا نهال‌هاي گياه حرا در دوره 12 برگي تحت تيمار نمك و سرب قرار گرفتند و از برگ‌هاي گياه حرا نمونه‌برداري انجام شد. پروتئين‌هاي نوتركيبAmSOD1 و AmSOD2گياه حرا كه به ترتيب نوعي CuZnSODو MnSODهستند، در باكتريE.coli به صورت His-AmSOD1 و His-AmSOD2 بيان شدند. سپس مراحل استخراج پروتئين نوتركيب از محتوي پروتئيني باكتري، خالص‌سازي، دياليز و تعيين غلظت انجام شد و پروتئين نوتركيب خالص به عنوان آنتي‌ژن براي توليد آنتي‌بادي به خرگوش تزريق شد. در ادامه با استخراج پروتئين از نمونه‌هاي برگ گياه حرا و انجام وسترن بلات، بيان آنزيم‌هاي AmSOD1و AmSOD2 در سطح پروتئين در نمونه‌هاي تحت تيمار مورد بررسي قرار گرفتند و سنجش فعاليت سوپر اكسيد ديسموتاز نيز انجام شد. در مرحله ديگر پژوهش، ميزان مقاومت به تنشهاي نمك، استات سرب، اتانول و هيدروژن پراكسيد در سويه كنترل و دو سويه تراريختAmSOD1 و AmSOD2 باكتري E.coli نيز بررسي شد. نتايج پژوهش نشان داد كه تنش نمك و سرب باعث افزايش بيان در سطح پروتئين در هر دو پروتئين AmSOD1 و AmSOD2 در مقايسه با شرايط كنترل مي‌شوند. اما تأثير تنش سرب در افزايش مقدار دو پروتئين بيشتر است. همچنين بررسي فعاليت آنزيم نيز مشخص كرد تحت تنش در زمان‌هاي ابتدايي نمونه‌برداري، فعاليت آنزيم‌هاي سوپراكسيد ديسموتاز افزايش داشته است و با گذشت زمان، فعاليت پروتئين كاهش يافت. بررسي ميزان مقاومت سويه‌هاي كنترل و تراريخت در باكتري نيز نشان داد در تنشهاي نمك، استات سرب و اتانول اعمال شده در محيط كشت سويه‌ها، اگرچه القاي ژن‌هاي كدكننده AmSOD1وAmSOD2 و تغيير در فعاليت آنزيم‌هاي آنتي‌اكسيداني AmSOD1 و AmSOD2 در هر دو سويه تراريخت، منجر به مقاومت اين سويه‌هاي باكتري در برابر تنش در مقايسه با سويه كنترل شدند، اما ژن كدكننده AmSOD1گياه حرا در باكتري در القاي مقاومت در برابر تنشهاي اكسيداتيو مؤثرتر است. به طور كلي پژوهش حاضر نشان داد كه هر دو آنزيم آنتي‌اكسيداني مورد بررسي، در مكانيسم‌هاي دفاعي آنتي‌اكسيداني به منظور كاهش آسيب و سميت‌زدايي راديكال سوپراكسيد ناشي از تنشهاي غير زيستي هم در گياه حرا و هم در باكتري، نقشي اساسي دارند و در مقايسه دو آنزيم AmSOD1 و AmSOD2، مشخص شد آنزيم AmSOD1 در سيستم دفاعي آنتي‌اكسيداني تأثير بيشتري دارد.
كلمات كليدي: Avicennia marina ، سوپر اكسيد ديسموتاز، آنتي‌بادي پلي‌كلونال، گونه‌هاي فعال اكسيژن، تنشهاي نمك و سرب
شماره ركورد
218259
گرايش رشته تحصيلي
كشاورزي
دانشكده
مهندسي كشاورزي
دانشگاه
دانشگاه صنعتي اصفهان