توليد و عملكرد قزل¬آلاي رنگين¬كمان (Oncorhynchus mykiss) نر تغيير‌جنسيت يافته تتراپلوييد

اصفهان : دانشگاه صنعتي اصفهان

علوم و مهندسي شيلات

دكتري

كاربرد مهم تتراپلوييدي در قزل¬آلاي رنگين¬كمان توليد جمعيت‌هاي تريپلوييد به روش غيرالقايي است. يكي از مهم‌ترين نكات در القاي شوك حرارتي، تعيين زمان القاي شوك است. زمان القاي شوك به عوامل مختلفي مانند اندازه تخمك، فاصله زماني اوولاسيون تا استحصال تخمك و نژاد ماهي وابسته است. دراين مطالعه تاثير سن مولد ماده در دو بازه +2 و +4 سال بر زمان وقوع اولين تقسيم ميتوزي به منظور بهينه‌سازي زمان القاي شوك جهت دستيابي به بيشينه بازده تتراپلوييدي اجرا شد. نتايج نشان داد كه وقوع اولين تقسيم سلولي در تخم¬هاي حاصل از مولدين با سن +2 برابر 06/104 ± 64/5528 درجه-دقيقه و در گروه مولدين +4 معادل 16/60 ± 5/5802 درجه-دقيقه بود(05/0P<) . سطح پلوييدي جنين¬هاي حاصل با استفاده از روش هايي نظير فلوسايتومتري و بررسي نقاط سازمان‌دهنده هستكي در مرحله چشم زدگي صورت گرفت و وقوع تتراپلوييدي در دامنه 40-100 درصد به اثبات رسيد. بچه ماهيان شوك‌دهي شده به مدت دو ماه با استفاده از خوراك حاوي 17 آلفا متيل تستوسترون، به منظور توليد نرهاي تغيير جنسيت‌يافته تغذيه شدند. يكي از روش‌هاي سنجش صحت پلوييدي، استفاده از آغازگر ريزماهواره به منظور شناسايي افراد پلي‌پلوييد است. در اين تحقيق ده جفت آغازگر ريزماهواره به منظور شناسايي ماهيان تتراپلوييد به‌كار برده شد، كه تنها آغازگر Omm1376 توانايي شناسايي افراد تتراپلوييد از ديپلوييد را داشت. در ادامه، تاثير شوك حرارتي ديرهنگام بر فرايند متيلاسيون DNA به عنوان يكي از مهم‌ترين فرآيندهاي اپي ژنتيكي از طريق توالي‌يابي مرتبط با چندشكل تقويت شده (SRAP) در مرحله چشم زدگي با استفاده از HpaII و ده جفت آغازگر متفاوت صورت گرفت. تنها 6 ناحيه از 96 ناحيه تكثير شده در سه جفت از آغازگرها، داراي اختلاف در بين ماهيان گروه شاهد و شوك‌دهي شده بودند كه احتمالا نشان‌دهنده اختلاف در نقاط متيله شده در اين دو گروه بود. در سن دو سالگي و پس از وقوع بلوغ جنسي در ماهيان، ارزيابي كيفيت اسپرم توليد شده در نرهاي تتراپلوييد و ديپلوييد تغييرجنسيت يافته، انجام شد. خصوصيات فيزيكي اسپرم، شامل تراكم، pH و اسمولاريته، تفاوت معناداري را در دو گروه ماهيان نشان نداد. براي سنجش درصد و طول دوره تحرك اسپرم از CASA استفاده شد و نتايج تفاوت مشخصي را در بين شاخص¬هايي نظير سرعت حركت مستقيم بين دو گروه آزمايشي نشان نداد. صحت ديپلوييدي محتمل در اسپرم ماهيان تتراپلوييد تغيير جنسيت يافته با روش فلوسايتومتري ارزيابي شد كه نتايج نشان‌دهنده دوبرابر بودن محتواي DNA اسپرم در تتراپلوييدها نسبت به افراد ديپلوييد بود. ريخت‌شناسي اسپرم و بررسي ابعاد سلولي آن در دو گروه ماهيان مولد توليدي، با استفاده از ميكروسكوپ الكتروني SEMانجام شد، مقايسه ابعاد، مساحت و حجم سرسلول اسپرم در نمونه¬هاي هاپلوييد و ديپلوييد، بيانگر افزايش معني دار آن در انواع ديپلوييد حاصل از مولدين نر تتراپلوييد بود. قابليت باروري اسپرم ماهيان تتراپلوييد تغييرجنسيت يافته در مقايسه با انواع ديپلوييد ارزيابي شد، درصد لقاح، چشم زدگي، تفريخ و بقا تا مرحله شناي فعال بين دو گروه حاصل تفاوت معني داري را نشان نداد. صحت تريپلوييدي نتاج در مرحله چشم زدگي با روش فلوسايتومتري و پس از آغاز تغذيه فعال با استفاده از سنجش ابعاد گلبولي، تاييد شد. نتايج اين تحقيق براي اولين بار، توليد نتاج تريپلوييد تمام ماده را به روش غيرالقايي در قزل¬آلاي رنگين¬كمان با استفاده از مولدين نر تتراپلوييد تغييرجنسيت¬يافته فراهم كرد.

222856

تكثير و پرورش آبزيان

مهندسي منابع طبيعي

دانشگاه صنعتي اصفهان