ارزيابي مولكولي و فنوتيپي ارقام مختلف فلفل دلمه اي براي مقاومت به ويروس پژمردگي لكه اي گوجه فرنگي

اصفهان : دانشگاه صنعتي اصفهان

بيماري شناسي گياهي

كارشناسي ارشد

فلفل دلمه اي (Capsicum annum L.) گياهي با ارزش اقتصادي و تغذيه اي بالا، متعلق به خانواده Solanaceae مي باشد. ويروس پژمردگي لكه اي گوجه فرنگي tomato spotted wilt virus (TSWV) به عنوان يكي از مخرب ترين ويروس هاي فلفل دلمه اي هر ساله باعث ايجاد خسارت هاي كمي و كيفي روي اين محصول مي گردد. اين ويروس در طبيعت توسط گونه هاي مختلف تريپس به ويژه Frankliniella occidentalis منتقل مي شود. كنترل TSWV به دليل وسيع بودن دامنه ميزباني ويروس و ناقل آن مشكل مي باشد. كنترل شيميايي ناقلين به دليل مقاومت ناقل به حشره كش ها كارايي پاييني دارد. امروزه استفاده از ارقام مقاوم فلفل دلمه اي داراي تك ژن غالب Tsw يكي از موثرترين روش هاي كنترل اين بيماري محسوب مي شود. هدف اصلي اين پژوهش، غربالگري ارقام فلفل دلمه اي براي رديابي ژن مقاوم Tsw با استفاده از نشانگر SCAC568 و ارزيابي فنوتيپي آن ها با استفاده از روش مايه زني مكانيكي در شرايط گلخانه بود. به منظور رديابي ژن مقاوم Tsw ، 40 ژنوتيپ فلفل دلمه اي جمع آوري گرديد و استخراج DNA به روش CTAB انجام شد. آزمون PCR با استفاده از جفت اغازگر SCAC568F/SCAC565R انجام و محصول PCR توسط آنزيم برشي XbaI برش داده شد. بر اساس نتايج به دست آمده از تجزيه و تحليل مولكولي، ژن Tsw پيوسته به نشانگر SCAC568 در ژنوتيپ هاي Bachata، Darsena، SV99082 و Simpity به به صورت تك باند و هموزيگوس و در ژنوتيپ هاي Aranica، H127-1، H300، H414، H253، H124-1، Tormes و Lorca به صورت دو باند و هتروزيگوس رديابي گرديد. به منظور تهيه منبع TSWV، جمع آوري نمونه هاي آلوده به ويروس از گلخانه هاي فلفل دلمه اي در استان اصفهان انجام شد. از برگ ها و ميوه هاي فلفل دلمه اي داراي علائم لكه هاي حلقوي سبز زرد و بافت مرده ،استخراج RNA كل انجام و آزمون RT-PCR با استفاده از جفت آغازگر هاي FJJ200274/FJJ200275 و Tobamo-F/Tobamo-R به ترتيب جهت تاييد آلودگي نمونه ها به TSWV و عدم آلودگي آن ها به توباموويروس ها ي آلوده كننده فلفل دلمه اي انجام شد. در نمونه ها قطعه مورد انتظار bp810 با جفت آغازگر اختصاصي FJJ200274/FJJ200275 تكثير شد، اما هيچ قطعه اي با جفت آغازگر Tobamo-F/Tobamo-R تكثير نگرديد. جهت خالص سازي بيولوژيكي ويروس، از بافت برگ يا ميوه گياهان بررسي شده در RT-PCR عصاره گيري شد و مايه زني مكانيكي روي برگ هاي گياه توتونNicotinia glutinosa در مرحله چهار تا پنج برگي انجام شد. پس از 10-7 روز علايم لكه هاي حلقوي موضعي و سپس علايم موزاييكي روي برگ هاي ايجاد شدند. جهت ارزيابي فنوتيپي بيماري، 35 رقم فلفل دلمه اي در مرحله چهار تا پنج برگي با استفاده از بافت برگ N. glutinosa مايه زني شدند و در زمان هاي 14، 21 و 28 روز پس از مايه زني بر اساس شدت علايم، امتياز دهي انجام گرديد. بر اساس ارزيابي فنوتيپي 28 روز پس از مايه زني تنها پنج ژنوتيپ Sanston، Cassiano، Paramo و Lemonchelo و Tarento كه در ارزيابي ژنتيكي توسط نشانگر SCAC568F/SCAC565R فاقد ژن مقاوم بودند، به عنوان مقاوم و بقيه ارقام به عنوان حساس ارزيابي شدند. در هيچكدام از اين ارقام ژن Tsw رديابي نشد. در تمامي ژنوتيپ ها مورد استفاده در ارزيابي فنوتيپي، در آزمون RT-PCR با استفاده از جفت آغازگر اختصاصي FJJ200274/FJJ200275 قطعه مورد انتظار bp810 تكثير شد، به همين دليل به نظر مي رسد ژنوتيپ ها ي فوق نسبت به TSWV متحمل باشند. حساس بودن ژنوتيپ ها ي H300، H253،H414،H124-1، H127-1، Tormes،Lorca،Darsena،Bachata، Aranica، SV99082 و Simpiy نسبت به TSWV با وجود دارا بودن ژن مقاوم Tsw مي تواند به دليل شكست مقاومت باشد. همچنين عدم وجود ژن مقاوم Tsw در ژنوتيپ ها ي مقاوم نشان دهنده وجود منابع جديدي از مقاومت در آن ها است. شناسايي ژن يا ژن هاي دخيل در اين ژنوتيپ ها مي تواند باعث افزايش بينش ما در زمينه مكانيسم هاي مقاومت به بيماري ناشي از TSWV در فلفل دلمه اي شود. كلمات كليدي: فلفل دلمه اي، ويروس پژمردگي لكه اي گوجه فرنگي، ژنوتيپ، مقاومت، ژن Tsw

223113

ويروس شناسي

مهندسي كشاورزي

دانشگاه صنعتي اصفهان