مطالعه بيوانفورماتيك، كلونينگ، بيان و تخليص يك فيوژن پروتئين جديد بر پايه اپي توپ هاي فلاژلين، پيلي و OprF سودوموناس آئروژينوزا

رشت

مقدمه: سودوموناس آئروژينوزا به عنوان يك پاتوژن فرصت طلب نقش مهمي در عفونت هاي بيمارستاني ايفا مي كند. مقاومت فزاينده به عوامل ضد ميكروبي و ميزان بالاي مقاومت آنتي بيوتيكي در طول درمان، عفونت هاي سودوموناس آئروژينوزا را تبديل به عفونت هاي شديد و تهديد كننده زندگي مي كنند. امروزه از واكسن شناسي معكوس بطور چشمگيري در طراحي واكسن استفاده مي شود. هدف اصلي اين مطالعه طراحي يك واكسن بر پايه اپي توپ با استفاده از ابزار هاي بيوانفورماتيك بر عليه سودوموناس آئروژينوزا مي باشد. مواد و روش¬ها: ابتدا با استفاده از مطالعات بيوانفورماتيكي اپي توپ هاي ايمونوژن دو پروتئين OprF و PilA شناسايي و در داربست فلاژلين سودوموناس آئروژينوزا طراحي و سنتز شد. فيوژن پروتئين مورد مطالعه در سويه E. coli BL21 بيان و ميزان كيفي آن با روش SDS-PAGE مورد بررسي قرار گرفت. تخليص فيوژن پروتئين‌ نوتركيب با روش كروماتوگرافي ميل تركيبي و با استفاده از رزين نيكل انجام شد. غلظت پروتئين تخليص شده با استفاده از نانودراپ و روش برادفورد اندازه گيري شد. پروتئين نوتركيب تخليص شده با روش وسترن بلات تاييد شد. در نهايت توانايي اپسونوفاگوسيتوز آنتي بادي هاي تخليص شده عليه پروتئين فيوژن نوتركيب با ماكروفاژهاي موشي و كمپلمان ارزيابي شد. نتايج: مطالعات بيوانفورماتيكي منجر به شناسايي و انتخاب 4 اپي توپ ايمونوژن شد. بيشترين ميزان بيان پروتئين نوتركيب در ميزبان باكتريايي، حدود 7 ساعت بعد از القاء با IPTG تعيين شد. ميزان پروتئين نوتركيب تخليص شده در يك ليتر از كشت باكتري حدود µg/ml 470 بود. پروتئين نوتركيب تخليص شده با روش وسترن بلات و با استفاده از آنتي بادي مونوكلونال ضد 6 اسيد آمينه هيستيدين تاييد شد. حضور آنتي بادي خرگوشي ضد فيوژن پروتئين توانست فاگوسيتوز سودوموناس آئروژينوزا را افزايش دهد طوري كه تعداد سلول هاي باكتريايي زنده بيش از 6/69 % در مقايسه با سرم نرمال خرگوشي كاهش دهد. نتيجه¬گيري: نتايج حاصل از اين مطالعه نشان مي دهد كه فيوژن پروتئين طراحي شده مي تواند به عنوان يك كانديد واكسن عليه سودوموناس آئروژينوزا عمل نمايد. كليدواژه ها: سودوموناس آئروژينوزا، پروتئين فيوژن، واكسن، PilA، OprF

224125

علوم پزشكي گيلان