آناليزجمعيت باكتري¬هاي اندوفيت همراه با درختان مركبات مبتلا به بيماري زوال

97/7/17

چكيده بيماري زوال مركبات در سال¬هاي اخير موجب مرگ تعداد زيادي از درختان مركبات پيوند شده روي پايه بكرايي در نواحي كوهپايه¬ايجنوب استان كرمان شده است. تحقيقات صورت گرفته در خصوص سبب شناسي بيماري مذكور، تاكنون منجر به شناخت دقيق و قطعي عامل بيماري در منطقه نشده است.باكتري¬هاي اندوفيت در سال¬هاي اخير به منظور كنترل بيولوژيك بيمارگرهاي گياهي مورد توجه قرار گرفته¬اند. اين پژوهش با هدف بررسي تنوع باكتري¬هاي اندوفيت درختان مركبات سالم و مبتلا به زوال انجام شد. براي اين منظور نمونه¬هاي گياهي از اندام¬هاي مختلف درختان مركبات سالم و مبتلا به زوال در منطقه جيرفت جمع¬آوري شدند. نمونه¬ها پس از ضدعفوني سطحي، در محيط كشت آگار غذايي غني شده با ساكارز كشت داده شدند. در مجموع 155 جدايه باكتري جداسازي و خالص سازي و بر مبناي خصوصيات مورفولوژيكي و بيوشيميايي گروهبنديو شناسايي شدند. رفتار آنتاگونيستي جدايه¬هاي باكتري عليه Botrityscinerea درشرايطin vitroبه روشكشت متقابل و ايجاد هاله بازدارنده مورد بررسي قرار گرفت و نتايج نشان داد بين جدايه¬ها از نظر ايجاد هاله بازدارنده در سطح احتماليك درصد(P≤0.01)تفاوت معني¬داري وجود دارد و جدايه¬هايuj116، uj117،uj100 ، uj97وuj99 با ميانگين هاله بازدارنده بيشتر از يك سانتي¬مترموثرترين جدايه¬ها بودند.توليد آنتي¬بيوتيك سورفكتين، آنزيم پروتئاز، ليپاز و سيانيد هيدروژن كه از فاكتورهاي كنترل بيولوژيك هستندتوسط جدايه¬ها مورد بررسي قرار گرفت.جدايه¬هاي uj20،uj22، uj121،uj127،uj128، uj150و uj152با توليد بيشترين ميزان آنزيم پروتئاز موثرترين جدايه¬ها بودند و در بررسي مولكولي متعلق به جنسBacillusبودند. جدايه¬هاي uj14، uj30، uj44، uj33وuj57با توليد بيشترين ميزان آنزيم ليپاز موثرترين جدايه¬ها بودند و در شناسايي مولكولي متعلق به جنس¬هاي Bacillus، PseudomonasوStaphylococcusبودند. جدايه¬هاي uj5، uj17، uj27، uj64، uj149، uj35، uj134، uj154وuj94 بيشترين ميزان توليد سيانيد هيدروژن را داشتند و متعلق به جنس¬هاي Acinetobacter،Staphylococcus،Curtobacteriumو Bacillusبودند. جدايه¬هاي uj117، uj118،uj127،uj137، uj148، uj116، uj126وuj134با توليد بيشترين ميزان آنتي¬بيوتيك سورفكتينموثرترين جدايه¬ها بودند و در شناسايي مولكولي جدايه uj117متعلقبه جنسPaenibacillusو جدايهuj134متعلق به جنس Staphylococcusبود.جدايه¬ها بر مبناي خصوصيات مورد بررسي توسط نرم افزار DSAASTATوSPSSآناليز و در 22 گروه قرارگرفتند. از هرگروه نماينده¬هايي انتخاب و پس از استخراج DNA، ژن 16S rRNA طي واكنش زنجيره¬اي پليمراز با استفاده از آغازگرهاي 63fو 1387r تكثير و محصول توالي يابي شد. مقايسه توالي¬هاي بدست آمده با توالي¬هاي موجود در پايگاه داده-ايNCBI و رسم درخت فيلوژني با نرم افزار MEGA5نشانداد كه جدايه¬هاي uj76، uj150، uj13، uj14، uj19، uj60، uj22، uj79، uj4، uj59،uj147، uj41، uj94، uj38،uj65، uj44، uj128به جنس Bacillus، جدايه¬هاي uj30، uj134، uj135به جنسStaphylococcus، جدايه¬uj117با جنس Paenibacillus، جدايه¬uj154به جنس Curtobacterium، جدايه uj115به جنس Aeromicrobium، جدايه¬uj51به جنس Stenotrophomonas، جدايه¬هايuj56، uj33، uj123به جنس Pseudomonasو جدايه¬هاي uj35، uj16، uj103، uj109، uj125به جنس Acinetobacterتعلق دارند. نتايج اين پژوهش نشان داد باكتري Aeromicrobium، Paenibacillusو Curtobacterium فقط در گياهان بيمار و باكتري Stenotrophomonas فقط در گياهان سالم وجود داشتند كه احتمالا در افزايش و كاهش شدت علائم بيماري نقش دارند. رديابي فيتوپلاسما و ليبري¬باكتر با استخراج DNAاز نمونه¬هاي گياهيو انجام واكنش زنجيره¬اي پليمراز آشيانه¬اي با استفاده از آغازگرهاي P1،P7وR16R2،R16F2nبراي فيتوپلاسما و fD1، rP1و OI1، OI2cبراي ليبري¬باكتر، جهت تكثير قطعه اي از ژن 16S rRNA، انجام و محصول حاصله توالي يابي شد. مقايسه توالي¬هاي بدست آمده با توالي¬هاي موجود در پايگاه داده¬اي NCBI، نشان داد كه CandidatusPhytoplasmaaurantifoliaو CandidatusLiberibacterasiaticusهمراه با علايم بيماري بودند. به طور كلي باكتري Ca. Liberibacterفقط در نمونه¬هاي بيمار رديابي شد در حاليكه Ca. Phytoplasma در همه نمونه¬ها وجود داشت كه دلالت بر اين دارد كه عامل زوال مركباتCa. Liberibacter مي¬باشد و همراهيCa. Phytoplasma منجر به تشديد علايم بيماري خواهد شد. واژگانكليدي: آنتي¬بيوتيك، باكتري اندوفيت، زوال، كنترل بيولوژيك

231348

دانشگاه جيرفت

آزادوار،مهدي

عليزاده،حميدرضا