توليد پروتئين Ag85B از مايكوباكتريوم توبركلوزيس به ‌صورت مولكول نو تركيب متصل به Fc γ1 از IgG1 انساني، در Pichia pastoris و بررسي ايمني ‌زايي آن‌ ها در موش

دانشگاه علوم پزشكي كردستان

پزشكي مولكولي

زمينه و هدف: سل يكي از مهمترين بيماري ‌هاي عفوني و يكي از شايعترين علل مرگ و مير در دنيا خصوصاً در كشورهاي در حال توسعه مي ‌باشد. اين بيماري به واسطة عفونت با مايكو باكتريوم توبركلوزيس ايجاد مي‌شود. طبق گزارش سازمان بهداشت جهاني در سال 2017 حدود 10 ميليون نفر به اين بيماري مبتلا شده كه از اين تعداد حدود 3/1 نفر جان خود را از دست داده ‌اند. همچنين تخمين زده مي‌شود كه حدود 2 ميليارد نفر نيز در سراسر دنيا به فرم نهفته بيماري مبتلا مي ‌باشند. بيماراني كه به عفونت هم زمان سل مقاوم به دارو و ايدز مبتلا مي ‌شوند دچار درصد بالايي از مرگ و مير مي ‌شوند. علي رغم كارايي نا مناسب واكسن BCG در بزرگسالان (حدود 0 تا 80%(، هنوز اين واكسن به عنوان مهمترين واكسن ضد توبركلوزيس استفاده مي‌گردد. بنابراين، استفاده از يك واكسن با كارايي بهتر نسبت به واكسن BCG مي ‌تواند در پيشگيري از بيماري سل نقش موثري داشته باشد. در اين پروژه پروتئين زير واحد نوتركيبAg85B-Fcγ1 ساخته شده و ايمني زايي آن بر روي موش‌هاي C57BL/6 مورد ارزيابي قرار گرفت. مواد و روش ها: پس از استخراج توالي مربوط به هركدام از ژن هاي fbpBو Fcγ1 از بانك اطلاعاتي NCBI و ساخت كانستراكت مورد نظر در پلاسميد pPICZα A توسط شركت Generay، اين پلاسميد به روش كلريد كلسيم به داخل باكتري ايكولاي سويهTOP10 F´ ترانسفورم شده و پس از استخراج و سپس خطي شدن توسط آنزيم SacI مجدداً به روش الكتروپوريشن به داخل مخمر پيكيا پاستوريس سويه GS115 ترانسفورم شد. پروتئين بيان شده با روش ‌هاي ELISA، SDS-PAGE و Western blotting مورد ارزيابي و كنترل قرار گرفت. در نهايت با استفاده از روش BCA غلظت مناسب پروتئين جهت تزريق به موش تعيين شده و پس از تزريق، ميزان ايمني زايي پروتئين نوتركيب در موش توسط روش Real-time PCR، بر اساس افزايش و يا كاهش ميزان بيان RNA سايتوكاين‌ هاي IFN-γ و TGF-β به صورت كمي مورد ارزيابي قرار گرفت. نتايج: همانطور كه انتظار مي ‌رفت، نتايج حاصل از بررسي cDNA توليد شده از هركدام از سايتوكاين‌ ها نشان داد كه ميزان بيان ژن IFN-γ در بالاترين سطح خود بوده، بنابراين پاسخ ايمني به سمت افزايش Th1 توليد كننده IFN-γ رفته است. هچنين يك افزايش متوسط در بيان TGF-β ديده شده كه به نوبه خود مي‌تواند توليد بيش از اندازه IFN-γ را كنترل كرده و از آسيب بافتي جلوگيري كند. نتيجه گيري: به طور كلي مي‌توان گفت كه آنتي ژنAg85B به عنوان مهمترين پروتئين فاز حاد و نهفته عفونت مايكو باكتريوم توبركلوزيس محسوب مي‌شود. بر اساس نتايج به دست آمده، فيوژن پروتئين نوتركيبAg85B- Fcγ1، ضمن حضور آنتي ژن فاز حاد ، داراي ناحيه Fc جهت تحويل هدفمند اين آنتي ژنها به سلول‌هاي پردازش كننده آنتي ژن نيز مي‌باشد. از آنجايي كه غيرسمي بودن واكسن‌ هاي نو تركيب به عنوان يكي از مهمترين خصوصيات اين واكسن‌ ها محسوب مي ‌شود، با توجه به پاسخ مناسب ايمني سلولي در بررسي ‌هاي مولكولي سايتوكاين‌ هاي ايمني، در صورت ايمني ‌زا بودن اين واكسن نو تركيب در موش ‌هاي واكسينه شده در معرض ميكروب سل ، در آينده مي‌ توان از آن به عنوان جايگزيني مناسب براي واكسن BCG در افراد بالغ و همچنين افراد مبتلا به نقص سيستم ايمني از جمله افراد مبتلا به ويروس HIV استفاده كرد. كلمات كليدي: مايكو باكتريوم توبركلوزيس؛ سل نهفته؛ واكسن زير واحد؛ پيكيا پاستوريس؛ الكترو پوريشن

237398

دانشگاه علوم پزشكي كردستان

پزشكي مولكولي

پزشكي

دانشگاه علوم پزشكي كردستان

عباسعلي اميني، عبدالرحيم رضايي