طراحي پپتيد ضدميكروبي جديد برپايه پپتيد مگائينين 2 و بررسي طيف اثر ضد ميكروبي آن

لنگرود

مقدمه :مقاومت نسبت به آنتي بيوتيك¬هاي متداول به دليل پديدار شدن روزافزون گونه¬هاي مقاوم باكتريايي، درمان بيماري¬هاي عفوني را با مشكلات زيادي روبه رو كرده است. از اين رو، در اين مطالعه طراحي و توليد نوتركيب يك پپتيد ضدميكروبي مورد توجه قرار گرفت. روش كار: با استفاده از توالي پپتيدي مگائينين 2 و مشتقات آن و در نظر گرفتن مطالعات انجام شده در زمينه طراحي پپتيدهاي ضدميكروبي جديد، يك توالي 19 اسيد آمينه¬اي طراحي شد كه در آن اسيدآمينه¬هاي ليزين، هيستيدين و سرين موجود در توالي مگائينين 2 با آرژينين جايگزين شده و تريپتوفان جايگزين اسيد آمينه¬ هيدروفوب فنيل آلانين شده است. ژن متناظر با اين توالي پپتيدي طراحي شد و ساختار ژن پس از سنتز در درون وكتور pTYB21 كلون شد و پس از تأييد، پلاسميد نوتركيب در باكتري اشرشيا كولي سويه BL21 بيان شد. توليد فيوژن پروتئين حاصل از اتصال پپتيد به دومين متصل شونده به كيتين از طريق رابط اينتئيني، با انجام آزمايش SDS PAGE مورد تاييد واقع شد. پپتيد با استفاده از ستون كيتين و تفكيك با عامل احيا كننده تيولي تخليص شد. سپس، اثر ضد ميكروبي آن بر پنج گونه باكتريايي، شامل باكتري استافيلوكوكوس اورئوس، انتروكوكوس فيكاليس، كلبسيلا پنومنيه، ايشريشيا كولي و پسودوموناس ايروژنوزا بررسي شد. نتايج: اثرات ضدميكروبي پپتيد طراحي و توليد شده در محدوده غلظتي 256-64 ميكروگرم بر ميلي¬ليتر بود. پپتيد ضدميكروبي طراحي شده، اثر ضدميكروبي قوي¬تري بر عليه باكتري¬هاي گرم¬مثبت نسبت به باكتري¬هاي گرم¬منفي نشان داد. اين اثر نسبت به پكسي¬گانان به عنوان يك پپتيد ضدميكروبي تجاري شده در درمان عفونت¬هاي موضعي قوي¬تر بود. هم چنين، اثر هموليتيك آن بر گلبول¬هاي قرمز خون انسان مورد آزمايش قرار گرفت. پپتيد طراحي شده بر روي گلبول¬هاي قرمز خون انساني اثر هموليتيك نسبتاً قوي داشت كه در غلظت¬هاي بالاتر از 6/0 ميكروگرم بر ميلي¬ليتر مشاهده شد. نتيجه‌گيري: بطور كلي، پپتيد طراحي شده نياز به اصلاحاتي در طراحي اوليه براي رسيدن به تركيبي با اثرات بالقوه درماني دارد. كليد واژه‌ها: پپتيد ضد ميكروبي، مگائينين 2

33018

علوم پزشكي گيلان